




层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外,直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。分族分离时用短柱,一般凝胶柱长20-30厘米,柱高与直径的比较5:1─10:1,凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1,常用凝胶柱有50×25厘米,10×25厘米。滤板下的死体积应尽可能的小,如果支掌滤板下的死体积大,被分离组分之间重新混合的可能性就大,吉林树脂柱,其结果是影响洗脱峰形,出现拖尾出象,降低分辩力。在分离时,死体积不能超过总床体积的1/1000。
层析柱装柱步骤流程
1.计算每厘米柱床高度填料的数量;
2.选择合适的配件和末端筛网,选择不合适的滤网可能导致较高反压或填料泄露;
3.选择装柱流速
首先:拍排泡
第二:调水平
第三:匀浆
第四:装柱
第五: 绘制压力/流速曲线,树脂柱多少钱,装柱流速为大流速的70%-100%。
柱效检测
柱效主要取决于装柱。如果是离子交换或亲和层析填料,则不能使用有色物质,如蓝色葡聚糖。表征柱效的两个指标是理论板当量高度(hetp)和对称因子as,使用nacl或通过测定uv吸收或电导率进行计算。
使用nacl溶液进行测定,树脂柱生产商,优点样品是易得、安全,缺点是可能与填料发生反应,---是离子交换树脂,因此影响测定结果。使用进行测定,其不与层析填料发生反应,并且可通过检测280 nm处的紫外吸收进行测定,并且,测定缓冲液的浓度可提高至10倍。
硅胶柱层析和大孔树脂柱层析的区别?
大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂,具有---的大孔网状结构和较大的比表面积,可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物即非极性或极性较弱的物质,具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点.树脂吸附作用是依靠它和被吸附的分子(吸附质) 之间的范德华引力,通过它---的比表面进行物理吸附而工作,使有机化合物根据有吸附力及其分子量大小可以经一定溶剂洗脱分开而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目的.
硅胶柱的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离,一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附,整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程.其中有微孔,对不同化合物的吸附能力不同,然后选用适当的洗脱剂进行洗脱从而达到分离.
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