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一文了解亲和层析柱装柱注意事项

亲和层析 一般用于纯化蛋白质和---等大分子物质的方法的主要依据是各种大分子物质之间理化特性的差---。下面我们来分析一下亲和层析过程中的注意事项。

1.上样

亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短，通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件，包括上样流速、缓冲液种类、ph、离子强度、温度等，以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。

一般生物大分子和配体之间达到平衡的速度很慢，所以样品液的浓度不易过高，阴阳树脂柱，上样时流速应比较慢，以---样品和亲和吸附剂有充分的接触时间进行吸附。

---是当配体和待分离的生物大分子的亲和力比较小或样品浓度较高、杂质较多时，可以在上样后停止流动，让样品在层析柱中反应一段时间，阴阳树脂柱多少钱，或者将上样后流出液进行二次上样，以增加吸附量。样品缓冲液的选择也是要使待分离的生物大分子与配体有较强的亲和力。另外样品缓冲液中一般有一定的的离子强度，阴阳树脂柱生产厂家，以减小基质、配体与样品其它组分之间的非特---吸附。

生物分子间的亲和力是受温度影响的，通常亲和力随温度的升高而下降。所以在上样时可以选择适当较低的温度，使待分离的物质与配体有较大的亲和力，能够充分的结合；而在后面的洗脱过程可以选择适当较高的温度，使待分离的物质与配体的亲和力下降，以便于将待分离的物质从配体上洗脱下来。

上样后用平衡洗脱液洗去未吸附在亲和吸附剂上的杂质。平衡缓冲液的流速可以快一些，但如果待分离物质与配体结合较弱，平衡缓冲液的流速还是较慢为宜。如果存在较强的非特---吸附，可以用适当较高离子强度的平衡缓冲液进行洗涤，但应注意平衡缓冲液不应对待分离物质与配体的结合有明显影响，以免将待分离物质同时洗下。

影响大孔吸附树脂吸附性能的主要因素　　大孔吸附树脂的分离效果受溶液的ph值、吸附质的极性、分子大小、树脂柱的清洗和洗脱液的种类等因素制约，同时也与外界的温度和压强有关。影响其吸附性能的主要因素如下:(1)大孔吸附树脂的比表面积越大，一般吸附性能越好，吸附量越多。(2)大孔吸附树脂的孔径越大，吸附质分子在孔内的扩散速度也越大，有利于达到吸附平衡。经验表明，当吸附剂孔径与吸附质分子的直径比为6∶ 1左右时，吸附性能。(3)随着孔容的增加，大孔吸附树脂的吸附量增加。(4)大孔吸附树脂孔径的大小，直接影响不同大小分子的自由进入，从而使树脂吸附具有选择性。只有当孔径对于被吸附组分足够大时，比表面积才能充分发挥作用，且大孔吸附树脂的孔径分布越窄，吸附性能越好。(5)极性树脂较易吸附极性物质，非极性树脂较易吸附非极性物质。(6)若大孔吸附树脂上的功能基团与吸附质分子之间可以形成氢键或电子转移络合物，则有较强的吸附作用。(7)大孔吸附树脂的吸附一般都是放热过程，温度升高，吸附量将减少。(8)压强是影响大孔吸附树脂吸附的因素之一，压强越大，吸附量越多，而吸附速率也随着压强的增大而增大。(9)当溶液中存在两种以上溶质时，往往会引起一种溶质易吸附而另一种溶质的吸附量降低，一般来讲，对混合溶质的吸附较纯溶质的吸附效果差。(10)其中大孔吸附树脂丰富的微孔结构也是影响吸附量的重要因素