




一文了解亲和层析柱装柱注意事项
1.洗脱
亲和层析的另一个重要的步骤就是要选择合适的条件使待分离物质与配体分开而被洗脱出来。亲和层析的洗脱方法可以分为两种:特---洗脱和非特---洗脱。
(1)特---洗脱
特---洗脱是指利用洗脱液中的物质与待分离物质或与配体的亲和特性而将待分离物质从亲和吸附剂上洗脱下来。
特---洗脱也可以分为两种:一种是选择与配体有亲和力的物质进行洗脱,锦州树脂柱,另一种是选择与待分离物质有亲和力的物质进行洗脱。前者在洗脱时,选择一种和配体亲和力较强的物质加入洗脱液,这种物质与待分离物质竞争对配体的结合,在适当的条件下,如这种物质与配体的亲和力强或浓度较大,配体就会基本被这种物质占据,原来与配体结合的待分离物质被取代而脱离配体,从而被洗脱下来。
例如用凝集素作为配体分离糖蛋白时,可以用适当的单糖洗脱,单糖与糖蛋白竞争对凝集素的结合,可以将糖蛋白从凝集素上置换下来。
层析柱装柱步骤流程
1.计算每厘米柱床高度填料的数量;
2.选择合适的配件和末端筛网,选择不合适的滤网可能导致较高反压或填料泄露;
3.选择装柱流速
首先:拍排泡
第二:调水平
第三:匀浆
第四:装柱
第五: 绘制压力/流速曲线,装柱流速为大流速的70%-100%。
柱效检测
柱效主要取决于装柱。如果是离子交换或亲和层析填料,则不能使用有色物质,树脂柱供应,如蓝色葡聚糖。表征柱效的两个指标是理论板当量高度(hetp)和对称因子as,使用nacl或通过测定uv吸收或电导率进行计算。
使用nacl溶液进行测定,优点样品是易得、安全,缺点是可能与填料发生反应,树脂柱厂家,---是离子交换树脂,因此影响测定结果。使用进行测定,其不与层析填料发生反应,并且可通过检测280 nm处的紫外吸收进行测定,并且,测定缓冲液的浓度可提高至10倍。
平衡柱子
即用洗脱剂中极性小的溶剂(例如、、等)用计量泵(或氮气)打入(压入)层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶,不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来,而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外,树脂柱多少钱,此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润,且排出空气,有利于续后的洗脱分离过程。
当平衡用的溶剂从柱---出后,可以停止此过程,改用洗脱剂洗脱分离过程;平衡过程也可以再理行一段时间,将柱子中的空气多排出一些,但溶剂耗量也会增加。
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